LyoDt® Real-Time PCR-detectie-reagentia voor het bevriezen van cronobacteren - gedroogd poeder

LyoDt® Real-Time PCR-detectie-reagentia voor Cronobacter vriesgedroogd poeder

1.Inleiding

Crotonis een nieuw gedefinieerd geslacht van bacteriën, waarvan de voorgangerEnterobacter sakazakii. Crotonis een ernstige door voedsel overgedragen ziekteverwekker die voornamelijk wordt overgedragen door besmette zuigelingenvoeding, waardoor neonatale meningitis, sepsis en necrotiserende enterocolitis ontstaan.

Dit product is een vriesgedroogd real-time PCR-reagens voor de detectie vanCrotonHet gebruikt het sterk bewaarde ompA-gen vanCrotonHet is een mastermix met alle benodigde ingrediënten, met uitzondering van de DNA-sjabloon, en wordt vooraf als eenmalige test in PCR-buizen voor eenvoudig gebruik gedistribueerd.Dit product vereist geen koude keten voor transport en opslag, waardoor de verzendkosten aanzienlijk worden verlaagd en eventuele verliezen door reagensverspilling en aerosolverontreiniging worden geëlimineerd.

2. Specificaties en samenstelling

3. opslag En houdbaarheid

Bewaar bij omgevingstemperatuur (5-30°C). Het is stabiel tot 12 maanden. Wanneer de vacuümverpakking is geopend, bewaart u de ongebruikte producten in de bijgeleverde herverzegelbare plastic zak met de droogmiddelen.en in de aluminiumfolie zak.

Voorzichtigheid:

De verkleining van het reagenspellets geeft aan dat er vocht in de buis zit en dat het reagens vochtig is.Alle reagentia met een aanzienlijk kleinere pelletsomvang dan normaal moeten vóór gebruik worden weggegooid of met een positieve controle worden getest.voor steekproefonderzoek.

4. ADDITIONELE UITRUSTINGEN EN REACTIVEN vereist

1) PCR-instrument in realtime

2) Pipetten en tips

3) Nucleasevrij water

4) Nucleïnezuur-extractie kit

5. COMPATIBELE PCR-systemen in realtime

ABI 7500/Fast, Roche LightCycler 480II, BioRad CFX96, Bioer LineGene 9600.

6Aanvaardbare exemplaren

Voedselverrijking bouillon, braken, diarree monsters, enz.

7. OPERATIEPROCEDURE

1) Extractie van nucleïnezuur

Extraheer DNA uit de monsters met behulp van een juiste extractie kit.Het wordt aanbevolen dat deDNAwordt geëluteerd met ongeveer 100 μl elutiebuffer(TEofnucleasevrije H₂O) in de laatste fase van deextractie.Het gezuiverde nucleïnezuur moet onmiddellijk worden gebruikt of bij -20°C worden bewaard.

2) Voorbereiding van positieve controle

De positieve controle kan tot 12 maanden worden bewaard bij omgevingstemperatuur vóór rehydratatie.₂Gebruik onmiddellijk of bewaar bij -20°C.

3) Real-time PCR-mixvoorbereiding

A) Open de vacuümverpakking en haal de 8-buisstroken die het reagens bevatten eruit.Als de geleverde buizen niet compatibel zijn met uw instrumentVerplaats het reagenspellettje naar een optische buis die met uw instrument verenigbaar is.

B) Open de buizen en gooi de dop (niet geschikt voor realtime PCR-machines) weg en bereid het reactiemengsel op ijs zoals hieronder.

stap vanextractie.Het gezuiverde nucleïnezuur moet onmiddellijk worden gebruikt of bij -20°C worden bewaard.

2) Voorbereiding van positieve controle

De positieve controle kan tot 12 maanden worden bewaard bij omgevingstemperatuur vóór rehydratatie.₂Gebruik onmiddellijk of bewaar bij -20°C.

3) Real-time PCR-mixvoorbereiding

A) Open de vacuümverpakking en haal de 8-buisstroken die het reagens bevatten eruit.Als de geleverde buizen niet compatibel zijn met uw instrumentVerplaats het reagenspellettje naar een optische buis die met uw instrument verenigbaar is.

B) Open de buizen en gooi de dop (niet geschikt voor realtime PCR-machines) weg en bereid het reactiemengsel op ijs zoals hieronder.

* Nucleasevrij water kan als negatieve controle worden gebruikt.

• De PCR wordt afgesloten met behulp van caps (strips) die geschikt zijn voor realtime PCR (niet verstrekt).

D) Vortex de buizen bij lage snelheid voor 10 ~ 15 sec, en centrifugeer bij 3000 rpm voor 20 sec en plaats ze in een real-time PCR-instrument.

2) RT-PCR-opstelling

Stel het reactievolume op 25 μl en de PCR-amplificatieprocedure als hieronder.

3) Analyse en interpretatie van de resultaten