Een kit voor snelle tests op voedselveiligheid is ontworpen om gedroogde PCR-reagentia in realtime te bevriezen voor snelle en gevoelige detectie van voedselpathogenen.

LyoDt^®Vriesgedroogde Real-Time PCR Detectiereagens voor Staphylococcus  aureus

Gebruik’s Handleiding

1. BESCHRIJVING

Staphylococcus aureus, een Gram-positieve kokken die behoort tot het geslacht Staphylococcus, is een veel voorkomende voedselpathogeen die enterotoxinen kan produceren die voedselvergiftiging veroorzaken. Dit product is een vriesgedroogde real-time PCR-reagens voor de detectie van Staphylococcus aureus. Het gebruikt de sterk geconserveerde NUC gen van Staphylococcus aureus als detectiedoelwit. Het is een mastermix die alle benodigde ingrediënten bevat, behalve sjabloon-DNA, en is voorgedoseerd als enkele test in PCR-buizen voor eenvoudig gebruik. Dit product vereist geen koudeketen voor transport en opslag, wat de verzendkosten aanzienlijk vermindert en mogelijk verlies door reagensverspilling en aerosolverontreiniging elimineert.

2. SPECIFICATIES & SAMENSTELLING

3. OPSLAG EN HOUDBAARHEID

Opslaan bij kamertemperatuur (5-30°C). Het is stabiel tot 12 maanden. Zodra de vacuümverpakking is geopend, bewaar de ongebruikte producten dan in de meegeleverde hersluitbare plastic zak met de droogmiddelen, en in de aluminiumfoliezak. 

VOORZICHTIG: 

Het kleiner worden van de reagenspellet is een indicatie dat er vocht in de buis sijpelt en dat de reagens is bevochtigd. Alle reagentia met een aanzienlijk kleinere pelletgrootte dan normaal moeten worden weggegooid of getest met een positieve controle voordat ze worden gebruikt voor monstertesten.   

4. AANVULLENDE APPARATUUR & REAGENTIA VEREIST

1) Real-time PCR-instrument

2) Pipetten en tips

3) Nuclease-vrij water

4) Nucleïnezuurextractiekit

5. COMPATIBELE REAL-TIME PCR-SYSTEMEN

ABI 7500/Fast, Roche LightCycler 480II, BioRad CFX96, Bioer LineGene 9600.

6. AANVAARDBARE MONSTERS

Voedselverrijkingsbouillon, braaksel, diarree-monsters, etc.

7. PROCEDURE

1) Nucleïne Auur Extractie

Extraheer DNA uit monsters met behulp van een geschikte extractiekit. Het wordt aanbevolen dat het DNA wordt geëlueerd met ongeveer 100μl elutiebuffer (TE of nuclease-vrije H₂O) in de laatste stap van extractie. Het gezuiverde nucleïnezuur moet onmiddellijk worden gebruikt of worden bewaard bij -20°C.

2) Positieve controle voorbereiding

De positieve controle kan bij kamertemperatuur worden bewaard vóór rehydratatie tot 12 maanden. Het moet vóór gebruik worden gerehydrateerd door toevoeging van 250 μl TE-buffer of nuclease-vrije H₂O, gevortexed met lage snelheid gedurende 15-20 seconden en gecentrifugeerd met lage snelheid gedurende 15-20 seconden. Onmiddellijk gebruiken of bewaren bij -20°C.

2) Real-Time PCR Mix Voorbereiding

A) Open de vacuümverpakking en haal de 8-buizenstrip eruits met de reagens. Controleer of de pellet zich op de bodem van de buis bevindt (Knip het aantal buizen af ​​zoals nodig indien nodig). Als de meegeleverde buizen niet compatibel zijn met uw instrument, breng dan de reagenspellet over in een optische buis die compatibel is met uw instrument.

B) Open de buizen en gooi de dop(pen) weg (niet geschikt voor real-time PCR-machines) en bereid de reactiemix op ijs zoals hieronder.

* Nuclease-vrij water kan worden gebruikt als negatieve controle.

C) Sluit de PCR af met doppen (strips) die geschikt zijn voor real-time PCR(niet meegeleverd).

D) Vortex de buizen met lage snelheid gedurende 10~15 seconden en centrifugeer bij 3000 tpm gedurende 20 seconden en plaats ze in een real-time PCR-instrument.

2) RT-PCR Setup

Stel het reactievolume in op 25μl en de PCR-amplificatieprocedure zoals hieronder. Verzamel FAM fluorescentie bij 60°C en selecteer GEEN als passieve referentie.

3) Resultaat Analyse en Interpretatie